分子量マーカー及び分子量マーカーの作製方法

• 新川 武
• 宮田 健
• 松▲崎▼ 吾郎

• 国立大学法人　琉球大学

従来のタンパク質の電気泳動には、ＳＤＳ－ＰＡＧＥやｎａｔｉｖｅ－ＰＡＧＥなどがある。ＳＤＳ－ＰＡＧＥは、タンパク質を変性剤で処理することにより、非天然の状態で分子量に依存した分離を行う方法である。この方法によれば、分子量マーカーは正確な分子移動度を示すことができる。一方、ｎａｔｉｖｅ－ＰＡＧＥは、タンパク質を変性剤で処理せず、天然の状態で分離を行う方法である。この方法によれば、タンパク質を天然の状態で分離できるが、等電点により移動度が異なるため、正確な分子量に依存した移動度を示すことができないという欠点がある。
また、タンパク質の機能分析の主要な方法にウェスタンブロット法がある。これは、目的タンパク質に特異的な抗体（１次抗体）と１次抗体に対する化学標識がされた抗体（２次抗体）を用いる手法である。しかし、ウェスタンブロット法では分子量マーカーの検出にも各々の多様な抗体が必要であり、有用な分子量マーカーが少ないのが現状である。

下記の特許文献１には、プロテインＡのＡＢドメインの遺伝子を１～６個挿入したプラスミドをそれぞれ作製し、それらのプラスミドで形質転換した大腸菌ＪＭ１０９から得られるタンパク質を同量ずつ混合してウェスタンブロット用分子量マーカーを作製することが開示されている。

また、下記の特許文献２には、サルモネラ菌鞭毛線維タンパク質にギ酸を加えて溶解し、ＢｒＣＮ（ブロモシアン）のギ酸の溶液を加えて断片化反応を行い、この断片化反応によって得られた反応混合物から種々の分子量をもつタンパク質を得る分子量マーカー作製方法が開示されている。これは、一つの分子量を有するタンパク質が化学的又は酵素的に断片化されて得られる断片を、異なる分子量を持つマーカータンパク質として利用するものである。これによれば、複数のマーカータンパク質を個別に生成して混合する手間を省略することができ、コスト的にも優位性があるものである。

さらに、下記の特許文献３には、精製したＴｙｐｅＩ ＣＡＴをスルホヒドリル基を有する化合物が存在しない酸化状態で約３０日間放置して、ＴｙｐｅＩ ＣＡＴの会合体からなる分子量マーカーを作製することが開示されている。これは、同一サブユニットから構成される多量体タンパク質を用いることにより、サブユニット間の等電点を同一にし、天然の状態においても分子量に依存した移動度を示すことができるものである。
【特許文献１】
特開平５－３２６９９
【特許文献２】
特開平２－２５７４５
【特許文献３】
特開平７－５３５８９

本発明は、イムノグロブリン結合ドメインを有するタンパク質を含有する分子量マーカー及びその作製方法に関するものである。

• C07K  14/195     細菌から
• C07K  14/31      ブドウ球菌（Ｇ）から
• C07K  14/315     ストレプトコッカス（Ｇ）から，例．エンテロコッカス
• C07K  19/00      ハイブリッドペプチド
• C12N  15/09      組換えＤＮＡ技術
• G01N  33/50      生物学的材料，例．血液，尿，の化学分析；生物学的特異性を有する配位子結合方法を含む試験；免疫学的試験
• C12P  21/02      ２以上のアミノ酸の結合順序が既知のもの，例．グルタチオン

• 2G045DA36 ペプチド、タンパク質
• 2G045FB03 免疫学的なもの
• 2G045FB05 電気化学的なもの
• 4B024AA11 分析、診断
• 4B024CA04 ｃＤＮＡ
• 4B024CA07 融合蛋白をコードするもの
• 4B024DA05 細菌
• 4B024EA04 プラスミド
• 4B024FA02 プロモ－タ－、オペレ－タ－
• 4B024GA11 遺伝子、プラスミドの導入
• 4B024HA11 分析、診断方法及び装置
• 4B064AG01 ペプチド、タンパク質
• 4B064CA19 外来遺伝子が導入された微生物
• 4B064CC24 遺伝子工学技術の利用
• 4B064DA13 分析、診断
• 4H045BA20 ５１～７０
• 4H045BA41 融合蛋白質
• 4H045CA11 細菌，放線菌
• 4H045DA86 抗原
• 4H045EA50 分析，診断材料
• 4H045FA74 遺伝子組換
• 4H045GA26 アフィニティークロマトグラフィー