血中ＨＣＶ検出方法及び抗ＨＣＶ治療の効果判定方法

• 宇都 浩文
• 坪内 博仁
• 馬渡 誠一

• 国立大学法人鹿児島大学

C型肝炎ウイルス（Hepatitis C Virus；HCV）はフラビウイルス科に属するプラス鎖一本鎖RNAウイルスであり、ヒトを固有の宿主とし、C型肝炎の原因になることが知られている。Simmondsらの系統解析法によると、HCVの遺伝子型は遺伝子型1～6に分類され、さらにそれらは複数のサブタイプに分類されている（非特許文献１）。HCVのRNAゲノムは、4つの構造タンパク質領域（Core、E1、E2、p7）と6つの非構造タンパク質領域（NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B）からなる１つの前駆体タンパク質（ポリプロテイン）をコードする（非特許文献２）。前駆体タンパク質は翻訳後、宿主細胞内のプロテアーゼ及びウイルスプロテアーゼによって加水分解され、それぞれ成熟した10種類のタンパク質となる。

HCVに感染し急性肝炎を発症した患者のうち、70％が持続感染して慢性化するといわれている。持続感染者の多くはALT高値等の肝障害を伴う慢性肝炎となり、やがて肝硬変、肝癌や肝不全へと進行する。HCVに対する主な抗ウイルス治療として、インターフェロン－αやインターフェロン－βの単独療法に加えて、ペグインターフェロンとリバビリンとの併用療法が標準的な治療法として確立されている。しかしこれらのインターフェロンを用いた抗ウイルス治療では、全治療者の約60％にしか治療効果が認められず、ウイルスが陰性化しても治療終了後に再燃する例は多い。またインターフェロンの治療効果は、HCVの遺伝子型と大きく関連しており、遺伝子型1や4に対しては効果が低く、遺伝子型2、3、5、6に対してはより効果が高いとされている。

現在のC型肝炎の治療法では、HCV排除のための24～72週間にわたる薬剤投与による抗ウイルス治療が主に行われている。薬剤投与期間を完遂して血清HCV RNAが陰性化した後、経過観察を行って24週目まで血清HCV RNAの陰性化が認められた場合、その治療効果は、持続性ウイルス学的著効（sustained virological response；SVR）と判断される。現在のC型肝炎治療は最終的にこのSVRを目指している。一方、薬剤投与終了時には血清HCV RNA陰性であったが、その後に血清HCV RNAが陽性化した場合、その治療効果は再燃と判断される。また所定の薬剤投与期間を完遂したが血清HCV RNAが陰性化しない場合、治療無効と判断される。従来の抗ウイルス治療では、抗ウイルス治療の効果を判定するためにHCV RNAを定量的に検出してHCV量の指標としている。HCV RNAの検出にはアンプリコア法やTaqMan法が用いられているが、ウイルスの陰性化をより厳密かつ早期に確認するために、より高感度なHCV検出法が求められている。

HCVのNS3とNS4Aによって構成される酵素NS3/4Aはセリンプロテアーゼ活性を有し、HCV複製に重要な役割を担い、直接作用型抗ウイルス剤（direct-acting antiviral agents；DAA）の標的の一つとなっている（非特許文献３及び４、特許文献１等）。DAAの一つであるNS3/4Aプロテアーゼ阻害剤は、近年、HCVに対する治療効果を飛躍的に向上させ、ペグインターフェロン＋リバビリン＋NS3/4Aプロテアーゼ阻害剤の3剤併用療法は、難治と言われていたHCV遺伝子型1型かつ高ウイルス量であるC型慢性肝炎患者において、高いウイルス消失効果をもたらしている。しかしNS3/4Aプロテアーゼ阻害剤の抗ウイルス作用の機序は十分解明されているとはいえない。

HCVの持続感染には、HCVが宿主免疫応答に対し抑制的に作用していることが示唆されている（非特許文献５）が、その機序は十分解明されていない。また、HCV感染者の中で、肝硬変へ進展するスピードには個人差があり、特にHCV慢性感染者ではあるがALT値正常を維持するALT正常持続HCV感染者（HCV carrier with persistent normal ALT；PNALT）は、ALTが高値の慢性肝炎患者と比較し、肝線維化のスピードが遅いことが報告されている（非特許文献６）。これらの臨床像の違いは、宿主免疫反応に起因していることが推測されるが、その反応の違いの理由は十分解明されていない。

本発明者らはこれまでプロテオミクスを用いた手法で、肝疾患患者の血清から主として肝臓癌のマーカーとなりうるタンパク質を同定する試みを行ってきた（非特許文献７～１０）。しかしそれらのタンパク質の生体内での機能や肝疾患患者の病態との関連は十分解明されていない。

本発明は、血中HCV検出方法及び抗HCV治療の効果判定方法に関する。

• G01N  33/576     肝炎のためのもの
• G01N  33/53      免疫分析；生物学的特異的結合分析；そのための物質
• C12Q   1/70      ウイルスまたはバクテリオファージを含むもの
• C07K  14/47      哺乳動物から

• 4B063QA01 定量、存否確認（ＦＷ）
• 4B063QA13 一次配列（例．塩基配列、アミノ酸配列）
• 4B063QA19 病気、病状の診断
• 4B063QQ10 ウイルス（←ウイロイド）
• 4B063QQ79 蛋白質、ペプチド、その構成成分、その誘導体
• 4B063QR16 蛋白質、ペプチド分解酵素←ＥＣ３．４．
• 4B063QR48 蛋白質、ペプチド、その構成成分、その誘導体
• 4B063QR51 作用表現の試薬（酵素等既出分は除く）（ＦＷ）
• 4B063QR66 色素、色原体、発色（光）剤、カプラー
• 4B063QS16 電気泳動
• 4B063QX10 その他（ＦＷ）
• 4H045BA10 α‐アミノ酸の数
• 4H045CA40 哺乳動物又は鳥類
• 4H045EA50 分析，診断材料