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白色花を生じるトルコギキョウ［Ｅｕｓｔｏｍａｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ（Ｒａｆ．）Ｓｈｉｎｎ．］を選別する方法

国内特許コード	P120008417
整理番号	RX12P12
掲載日	2012年12月19日
出願番号	特願2011-518602
登録番号	特許第5709140号
出願日	平成22年6月10日(2010.6.10)
登録日	平成27年3月13日(2015.3.13)
国際出願番号	JP2010060256
国際公開番号	WO2010143749
国際出願日	平成22年6月10日(2010.6.10)
国際公開日	平成22年12月16日(2010.12.16)
優先権データ	特願2009-139477 (2009.6.10) JP
発明者	坂田祐介橋本文雄清水圭一ウレドラバイセルモ
出願人	国立大学法人　鹿児島大学
発明の名称	白色花を生じるトルコギキョウ［Ｅｕｓｔｏｍａｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ（Ｒａｆ．）Ｓｈｉｎｎ．］を選別する方法
発明の概要	本発明は、トルコギキョウの白色花に関連する遺伝子マーカーの開発、及び該マーカーを利用した、開花前に又は有色品種から、白色花を生じるトルコギキョウを選別する方法、具体的には、トルコギキョウ［Ｅｕｓｔｏｍａｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ（Ｒａｆ．）Ｓｈｉｎｎ．］のＤＮＡサンプルから、アントシアニン合成酵素（ＡＮＳ）遺伝子中の白色花関連マーカー又は有色花関連マーカーのいずれかを検出することを含む、白色花を生じるトルコギキョウを選別する方法、及び該方法を実施するためのキットに関する。
従来技術、競合技術の概要	トルコギキョウ［Ｅｕｓｔｏｍａｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ（Ｒａｆ．）Ｓｈｉｎｎ．］は、リンドウ科に属し、アメリカ南西部を原産とする一年性の草本である。本種は、その大きな花と長い茎、そして花持ちのよさの点で、日本で最も人気の高い切花の一つとなっている。典型的なトルコギキョウの野生種の花色は紫色であり、その主要色素はデルフィニジン系のアントシアニンである。主に日本における商業育種によって、ピンク、白、クリーム色、藤色、赤などの多様な花色の系統が作出されているが、更なる花色の多彩化、効率的な花色育種法が望まれている。例えば、花色の複対立遺伝子が提唱されているが、白色花の形成機構はまだＤＮＡレベルでは詳しく証明されていない（特許文献１）。一方、野田らは、トルコギキョウでアントシアニン合成に関わるフラボノール合成酵素（ＦＬＳ）、ジヒドロフラボノール４還元酵素（ＤＦＲ）、カルコン合成酵素（ＣＨＳ）、アントシアニン合成酵素（ＡＮＳ）などの発現を詳しく解析しているが、これらの遺伝子と白色花との関係は不明である（非特許文献１）。
産業上の利用分野	本発明は、トルコギキョウ［Ｅｕｓｔｏｍａｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ（Ｒａｆ．）Ｓｈｉｎｎ．］のアントシアニン合成酵素（ＡＮＳ）遺伝子中の白色花関連マーカーを利用した、白色化を生じるトルコギキョウの選別方法、及び白色化を生じるトルコギキョウを選別するためのキットに関する。
特許請求の範囲	【請求項1】トルコギキョウ[Eustoma grandiflorum (Raf.) Shinn.]のDNAサンプルから、アントシアニン合成酵素(ANS)遺伝子中の有色花関連マーカーを検出することを含む、白色花を生じるトルコギキョウを選別する方法であって、前記有色花関連マーカーは、配列番号１のヌクレオチド2366～2459若しくは配列番号１９のヌクレオチド2379～2472、又は配列番号１のヌクレオチド2366～2459若しくは配列番号１９のヌクレオチド2379～2472において、1～数個のヌクレオチドの置換、付加、欠失若しくは挿入を含むポリヌクレオチドである、前記方法。【請求項2】配列番号１のヌクレオチド2366～2459又は配列番号１９のヌクレオチド2379～2472に隣接する5'側配列及び3'側配列に特異的にアニーリングすることができる正方向プライマー及び逆方向プライマーから成るプライマーセットによるDNAサンプルのPCR増幅と、その後の電気泳動によって、ANS遺伝子の遺伝子型の決定を行うことを特徴とする、請求項１記載の方法。【請求項3】前記プライマーセットは、配列番号３に示す正方向プライマー及び配列番号４に示す逆方向プライマーから成ることを特徴とする、請求項２記載の方法。【請求項4】配列番号１のヌクレオチド2366～2459又は配列番号１９のヌクレオチド2379～2472に隣接する5'側配列と3'側配列に特異的にアニーリングすることができる正方向プライマー及び逆方向プライマーから成るプライマーセットを含む、白色花を生じるトルコギキョウを選別するためのキット。【請求項5】前記プライマーセットは、配列番号３に示す正方向プライマー及び配列番号４に示す逆方向プライマーから成ることを特徴とする、請求項４記載のキット。
国際特許分類(IPC)	C12Q 1/68 核酸を含むもの C12N 15/09 組換えＤＮＡ技術 A01G 1/00 園芸；野菜の栽培
Fターム	2B022AA01 栽培方法 2B022AB17 花卉、鑑賞植物 4B024AA11 分析、診断 4B024BA07 酵素 4B024CA02 構造遺伝子 4B024CA09 プローブ 4B024DA01 植物細胞 4B024HA12 ＤＮＡプローブを用いるもの 4B063QA08 遺伝子機能 4B063QA12 制限部位、制限断片長、その多型性 4B063QQ04 高等植物（細胞、未分化細胞集団→ＱＱ０９） 4B063QQ21 酵素（ＦＷ） 4B063QQ43 構造遺伝子 4B063QR08 ＤＮＡ、ＲＮＡポリメラーゼ 4B063QR32 ＤＮＡ 4B063QR55 プローブ 4B063QR62 プライマー 4B063QS25 ＰＣＲ法 4B063QS34 核酸ハイブリダイゼーションにより結合させるもの
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出願権利状態	登録