TOP > 国内特許検索 > 熱ショックタンパク質ＨＳＰ６０の分離方法

熱ショックタンパク質ＨＳＰ６０の分離方法

国内特許コード P08A013418
掲載日 2008年5月30日
出願番号 特願2006-219450
公開番号 特開2008-043216
登録番号 特許第4929458号
出願日 平成18年8月11日(2006.8.11)
公開日 平成20年2月28日(2008.2.28)
登録日 平成24年2月24日(2012.2.24)
発明者
  • 又吉 盛健
出願人
  • 国立大学法人　鹿児島大学
発明の名称 熱ショックタンパク質ＨＳＰ６０の分離方法
発明の概要 【課題】簡便で、且つ効率的な熱ショックタンパク質HSP60の分離方法を提供することを目的とする。
【解決手段】細菌のスフェロプラストを1.5％～5％の塩溶液中で撹拌処理する。
【選択図】なし
従来技術、競合技術の概要


従来、細菌を40～45℃の高温で培養すると、HSP60等の熱ショックタンパク質の発現が誘導されて菌体内に発現することが知られている(非特許文献１及び２)。また、熱ショックタンパク質は、細菌の他に、ヒトを含めた真核生物まで存在することが判っている(非特許文献３)。熱ショックタンパク質の真核生物の細胞内局在としては、例えば、ミトコンドリアやクロロプラストが挙げられる(非特許文献４～６)。また、熱ショックタンパク質は、タンパク質の折りたたみや変性タンパク質の修正に関与することが知られている(非特許文献７及び８)。



一方、これまで、例えばHSP60は、細菌でも細胞質内に存在すると考えられていた（非特許文献１、３及び９～１１）。そこで、従来より、HSP60等の熱ショックタンパク質の抽出方法では、細胞壁や細胞膜を破砕することが不可欠な工程であった。細胞壁や細胞膜の破砕後、種々の煩雑な分別方法を用いて、熱ショックタンパク質を精製していた(非特許文献１２及び１３)。このような従来の熱ショックタンパク質の分離方法では、出発材料である細胞を破砕して得られる懸濁液には膜破片、リボソーム、核酸、細胞質内タンパク質が混在するため、熱ショックタンパク質のみを精製するには、多くの工程を必要とし、煩雑で、時間を費やし、また最終的な収量が少ないといった問題がある。



従って、これまでに効率的に熱ショックタンパク質を分離する方法が知られていなかった。



【非特許文献１】
Angelo Scorpioら, 「Journal of Bacteriology」, 1994年, 第176巻, p.6449-6456
【非特許文献２】
F. Goulhenら, 「Infection and Immunity」, 1998年, 第66巻, p.5307-5313
【非特許文献３】
Alejandro M. Vialeら, 「International Journal of Systematic Bacteriology」, 1994年, 第44巻, p.527-533
【非特許文献４】
McMullin T.W.ら, 「Molecular and Cellular Biology」, 1987年, 第7巻, p.4414-4423
【非特許文献５】
Jindal S.ら, 「Molecular and Cellular Biology」, 1989年, 第9巻, p.2279-2283
【非特許文献６】
Paul V. Viitanenら, 「The Journal of Biological Chemistry」, 1992年, 第267巻, p.695-698
【非特許文献７】
F. Ulrich Hartl, 「Nature」, 1996年, 第381巻, p.571-580
【非特許文献８】
Bernd Bukauら, 「Cell」, 1998年, 第92巻, p.351-366
【非特許文献９】
Gupta R.S.ら, 「Molecular Microbiology」, 1995年, 第15巻, p.1-11
【非特許文献１０】
Rafael A. Gardunoら, 「Journal of Bacteriology」, 1998年, 第180巻, p.505-513
【非特許文献１１】
Claire Hennequinら, 「Microbiology」, 2001年, 第147巻, p.87-96
【非特許文献１２】
Zahn R.ら, 「Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America」, 1996年, 第93巻, p.15024-15029
【非特許文献１３】
Gabriela E. Bergonzelliら, 「Infection and Immunity」, 2006年, 第74巻, p.425-434
産業上の利用分野


本発明は、例えば、細菌のペリプラズムに存在する熱ショックタンパク質HSP60(以下、「HSP60」という)の分離方法に関する。
特許請求の範囲 【請求項1】
(a) 細菌のスフェロプラストを1.5％～5％の塩溶液中で撹拌処理することで、溶液中に熱ショックタンパク質HSP60を遊離する工程と、
(b) 工程(a)で得られた溶液を固液分離手段に供することで、液相中に熱ショックタンパク質HSP60を分離する工程と、
(c) 工程(b)で得られた液相をタンパク質精製手段に供し、該液相から熱ショックタンパク質HSP60を分離精製する工程と、
を含む、ペリプラズム局在熱ショックタンパク質HSP60の分離方法。

【請求項2】
上記スフェロプラストが、細菌を細胞壁分解酵素で処理することによって得られるものであることを特徴する、請求項１記載の方法。

【請求項3】
工程(a)の前に、細菌を細胞壁分解酵素で処理することで、スフェロプラストを形成する工程を含む、請求項１記載の方法。

【請求項4】
上記細胞壁分解酵素がリゾチームであることを特徴とする、請求項２又は３記載の方法。

【請求項5】
上記固液分離手段が、遠心分離、濾過及び吸着から成る群から選択されるものであることを特徴とする、請求項１～４のいずれか１項記載の方法。

【請求項6】
工程(c)が、工程(b)で得られた液相を10000～40000rpmでの遠心分離に供することを含む、請求項１～５のいずれか１項記載の方法。

【請求項7】
上記細菌が大腸菌であることを特徴とする、請求項１～６のいずれか１項記載の方法。

【請求項8】
40℃～45℃の温度下で培養した細菌を使用することを特徴とする、請求項１～７のいずれか１項記載の方法。

【請求項9】
上記塩溶液が塩化ナトリウム溶液であることを特徴とする、請求項１～８のいずれか１項記載の方法。
国際特許分類(IPC)
Fターム
出願権利状態 登録

英語項目の表示

発明の名称 METHOD FOR SEPARATING HEAT SHOCK PROTEIN HSP60
発明の概要 PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for simply and efficiently separating heat shock protein PSP60.
SOLUTION: The method for separating the heat shock protein HSP60 comprises stirring bacterial spheroplast in a 1.5 to 5% salt solution, preferably treating the bacterial spheroplast with a cell-wall digesting enzyme.
※ 公開特許は弊社ホームページ内で開示資料とともに、特許公報も掲載しております。
アドレスは　http://www.ktlo.co.jp/002_seeds_.html

『 熱ショックタンパク質ＨＳＰ６０の分離方法』に関するお問合せ


  • 株式会社鹿児島ＴＬＯ 技術移転事業部
  • URL: http://www.ktlo.co.jp/
  • E-mail: e-mail address
  • Address: 〒890-0065 鹿児島県鹿児島市郡元1丁目21番40号　鹿児島大学内
  • TEL: 099-284-1631
  • FAX: 099-284-1632

お問合せ



※ 同じキーワードでJ-STORE内を検索することが出来ます。→ J-STORE内を検索

PAGE TOP

『 熱ショックタンパク質ＨＳＰ６０の分離方法 』に関するお問合せ


  • 株式会社鹿児島ＴＬＯ 技術移転事業部
  • URL: http://www.ktlo.co.jp/
  • E-mail: e-mail address
  • Address: 〒890-0065 鹿児島県鹿児島市郡元1丁目21番40号　鹿児島大学内
  • TEL: 099-284-1631
  • FAX: 099-284-1632

お問合せ

印刷用ページ

関連情報

特許マップ
技術シーズ
明細書 特許第4929458号
公開公報 特開2008-043216(PDF,583KB) PDF
特許公報 特許第4929458号(PDF,586KB) PDF

所属しているカテゴリ

出願人
IPC
Fターム
close
close
close
close
close
close
close